产品货号:
MT0170
中文名称:
Benzonase核酸酶(Strep II标签)
英文名称:
Benzonase Nuclease(Strep-tag II)
产品规格:
25KU|100KU|5000KU
发货周期:
1~3天
产品价格:
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Benzonase Nuclease是一种核酸内切酶,可将核酸降解成2~5个碱基的5‘单磷酸核苷酸,因其能高效降解任何形式(双链,单链,线状,环状)的DNA和RNA而没有蛋白裂解活性,又被称为“全能核酸酶”。Benzonase核酸酶能有效降低蛋白样品粘度,去除蛋白样品中核酸的污染,且无蛋白酶活性残留,核酸酶活性达1×106U/mg蛋白。Benzonase核酸酶在降低粘性的同时,也具有多种其他用途,如:减少了样品处理时间,增加了蛋白产量,离心时时沉淀和上清分离的更彻底,更便于溶液的离心(尤其是超滤);提高色谱纯化的效率等。
注:
保存:-20℃,有效期2年。
Benzonase核酸酶在非常广泛的条件下,都能保持很高的稳定性和消化核酸的活性,这使其能够与多种细胞裂解液,如RIPA,或含有多种离子和非离子型去污剂、还原剂的蛋白提取试剂等兼容。例如:>100mM的盐酸胍会完全抑制Benzonase活性,1mM的EDTA会部分抑制Benzonase活性,5mM的EDTA会使活性丧失90%,1mM的PMSF则不会抑制核酸酶活性。浓度<0.4%的Triton?X-100对核酸酶活性几乎无影响,<0.4%的脱氧胆酸钠使核酸酶可保持70%的活性,超过该临界值之后核酸酶活性会急剧降低,1%的浓度会使活性丧失70%;0.05%的SDS对核酸酶活性几乎无影响,而SDS浓度在0.1%~1%之间时,核酸酶在变性后活性会急剧降低,可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。另外,核酸酶可耐受6M尿素,当尿素达到7M时,核酸酶在变性后活性会急剧降低,亦可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。
37℃,pH8.0反应条件下,在30分钟内使△A260值降低1.0(相当于完全消化37μg DNA)的酶量定义为一个活性单位。
注意:含大量蛋白、细胞壁、其它盐分的粗制品,对该酶活性有部分抑制作用,使用时需要增加酶的用量。
对于Strep II标签的Benzonase核酸酶(MT0170,MT0171)可通过Strep Tactin XT Resin(MT0180)直接去除,去除率>95%;对于不带标签的Benzonase核酸酶(MT0068,MT0169),可通过色谱纯化去除核酸酶,然后可通过核酸酶残留检测试剂盒(MT0181)或ELISA检测来判断去除是否成功。常见的色谱纯化方式有阳离子交换介质和阴离子交换介质,具体的Benzonase去除条件如下表:
带Strep II标签的Benzonase核酸酶去除实验
50mL测试样品(20mM Tris-HCl,pH8.0,100mM NaCl,1mg/mL BSA,50U/mL Strep tagII Benzonase)。
在1~2mL/min流速下,穿过1mL Strep Tactin XT Resin,样本中的Benzonase核酸酶活性下降到<1U/mL(<1ng/mL)。
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实验类型 | 电泳蛋白样品制备 | 非药物蛋白生产 | 药物蛋白生产 | 疫苗、病毒生产 | 细胞药物 |
推荐货号 | MT0068:科研试剂 | MT0068:科研试剂 MT0170:Strep II标签 | MT0169:无内毒素 MT0171:无内毒素,Strep II标签 | ||
细胞数量 | 1×106个细胞(10mg组织) | 1g湿重(重悬液10mL) | 1L发酵上清液 | 1L培养物 | |
最低用量 | 125U(0.5μL) | 25U/mL(1μL) | 25U/mL(1μL) | 0.1U/mL(0.4μL) | 0.1U/mL(0.4μL) |
推荐用量 | 500U(2μL) | 250U/mL(10μL) | 250U/mL(10μL) | 25U/mL(100μL) | 5U/mL(20μL) |
作用时间 | 通常作用时间37℃在15~60min;25℃在30~120min; |
注:
- 带Strep II标签的Benzonase核酸酶融合了Strep-tag II标签(WSHPQFEK),使得在完成核酸消化后,方便的去除Benzonase。带Strep II标签的Benzonase核酸酶可牢固的结合于Strep Tactin XT Resin(货号:MT0180)上。由于Strep Tactin XT Resin和Strep Tactin Resin相比,其配体偶联牢固,不会造成蛋白脱落,因此通常在含有微量Strep-tag II标签的制品中,一步即可去除>98%的核酸酶污染,而Strep Tactin Resin无法达到。
- 无内毒素的两种Benzonase核酸酶,内毒素含量<40EU/mL(按照单位换算量计算为,每1000U中含有的内毒素<0.15EU),符合FDA关于核酸污染的处理规程,可适用于药用级别的研发和生产。
- 另外,核酸酶残留可通过我公司开发的基于荧光探针的Benzonase核酸酶残留检测试剂盒(MT0181)进行评测,15min即可完成检测,最低可检测到2ng/ml的核酸酶残留。
- 蛋白提取时去除核酸污染:在重组蛋白纯化或组织细胞样品蛋白提取时,Benzonase核酸酶可有效降低样品粘度,利于下游操作;
- 与细胞或细菌裂解液配合使用,去除粗提物中的核酸,降低溶液粘性,提高蛋白质产量;
- 减少存放的外周血单细胞(PBMC)的结块现象;
- 降解核酸,利于不可溶性蛋白复性前高质量包涵体制备;
- 有效去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响,改善蛋白质的分离效果,增强2-DE分辨率;
- 疫苗和病毒样品制备中DNA污染的去除。
- 蛋白提取时去除核酸污染
- 2D凝胶电泳
- Western Blot
- 生物制药
- 疫苗制备
组分 | 25KU | 100KU | 5000KU |
Benzonase核酸酶(Strep II标签,250KU/mL) | 100μL | 400μL | 20×1mL |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃,有效期2年。
图1:分别取不同量(0、0.125、0.25、0.5、1、5、10U)的Benzonase核酸酶消化人基因组DNA10min,进行琼脂糖电泳。 | 图2:A为未加Benzonase处理的,B为加Benzonase处理的样品进行二维电泳。如图所示,Benzonase处理的样品可显著增加二维电泳的分辨率。 |
图3:经RIPA裂解未经Benzonase核酸酶处理的样品,大量基因组DNA释放出来,呈鼻涕状。 | 图4:离心后,左管为未加Bezonase核酸酶,有鼻涕状粘稠物质悬浮在管中,右管为加Bezonase核酸酶,上清为透明液体。 |
Benzonase核酸酶在非常广泛的条件下,都能保持很高的稳定性和消化核酸的活性,这使其能够与多种细胞裂解液,如RIPA,或含有多种离子和非离子型去污剂、还原剂的蛋白提取试剂等兼容。例如:>100mM的盐酸胍会完全抑制Benzonase活性,1mM的EDTA会部分抑制Benzonase活性,5mM的EDTA会使活性丧失90%,1mM的PMSF则不会抑制核酸酶活性。浓度<0.4%的Triton?X-100对核酸酶活性几乎无影响,<0.4%的脱氧胆酸钠使核酸酶可保持70%的活性,超过该临界值之后核酸酶活性会急剧降低,1%的浓度会使活性丧失70%;0.05%的SDS对核酸酶活性几乎无影响,而SDS浓度在0.1%~1%之间时,核酸酶在变性后活性会急剧降低,可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。另外,核酸酶可耐受6M尿素,当尿素达到7M时,核酸酶在变性后活性会急剧降低,亦可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。
条件参数 | 最适条件 | 可作用条件范围 |
Mg2+ | 1~2mM | 1~10mM |
pH | 8.0–9.2 | 6–10 |
温度 | 37℃ | 0~42℃ |
DTT | 0~100mM | >100mM |
β-Mercaptoethanol | 0~100mM | >100mM |
一价阳离子浓度(如Na+,K+) | 0~20mM | 0~150mM |
PO43- | 0~10mM | 0~100mM |
37℃,pH8.0反应条件下,在30分钟内使△A260值降低1.0(相当于完全消化37μg DNA)的酶量定义为一个活性单位。
注意:含大量蛋白、细胞壁、其它盐分的粗制品,对该酶活性有部分抑制作用,使用时需要增加酶的用量。
对于Strep II标签的Benzonase核酸酶(MT0170,MT0171)可通过Strep Tactin XT Resin(MT0180)直接去除,去除率>95%;对于不带标签的Benzonase核酸酶(MT0068,MT0169),可通过色谱纯化去除核酸酶,然后可通过核酸酶残留检测试剂盒(MT0181)或ELISA检测来判断去除是否成功。常见的色谱纯化方式有阳离子交换介质和阴离子交换介质,具体的Benzonase去除条件如下表:
阴离子交换介质 | pH | 样品和平衡缓冲液 | Benzonase核酸酶 |
TMAE | 7.0 | 50mM Tris/200mM NaCl | not bound |
TMAE | 7.0 | 50mM Tris/50mM NaCl | not bound |
TMAE | 8.0 | 50mM Tris/250mM NaCl | not bound |
TMAE | 8.0 | >50mM Tris/100mM NaCl | not bound |
TMAE | 9.0 | >50mM Tris/200mM NaCl | not bound |
TMAE | 9.0 | 50mM Tris/100mM NaCl | not bound |
DEAE | 7.0 | 50mM Tris/200mM NaCl | not bound |
DEAE | 7.0 | 50mM Tris/50mM NaCl | not bound |
DEAE | 8.0 | 50mM Tris/250mM NaCl | not bound |
DEAE | 8.0 | >50mM Tris/100mM NaCl | not bound |
DEAE | 9.0 | >50mM Tris/250mM NaCl | not bound |
DEAE | 9.0 | 50mM Tris/50mM NaCl | not bound |
DMAE | 8.0 | >50mM Tris/250mM NaCl | not bound |
DMAE | 8.0 | 50mM Tris/50mM NaCl | not bound |
阳离子交换介质 | pH | 样品和平衡缓冲液 | Benzonase核酸酶 |
SO3- | 6.0 | 20mM phosphate/100mM NaCl | bound |
SO3- | 6.0 | 20mM phosphate/200mM NaCl | not bound |
SO3- | 5.0 | 20mM acetate/200mM NaCl | bound |
SO3- | 5.0 | >20mM acetate/700mM NaCl | not bound |
SO3- | 4.0 | >20mM acetate/300mM NaCl | bound |
SO3- | 4.0 | 20mM acetate/800mM NaCl | not bound |
C00- | 6.0 | 20mM phosphate/0mM NaCl | not bound |
C00- | 5.0 | 20mM acetate/40mM NaCl | bound |
C00- | 5.0 | 20mM acetate/100mM NaCl | not bound |
C00- | 4.0 | >20mM acetate/150mM NaCl | partially bound |
C00- | 4.0 | 20mM acetate/400mM NaCl | not bound |
带Strep II标签的Benzonase核酸酶去除实验
50mL测试样品(20mM Tris-HCl,pH8.0,100mM NaCl,1mg/mL BSA,50U/mL Strep tagII Benzonase)。
在1~2mL/min流速下,穿过1mL Strep Tactin XT Resin,样本中的Benzonase核酸酶活性下降到<1U/mL(<1ng/mL)。
相关搜索:Benzonase核酸酶(Strep II标签),全能核酸酶,全能核酸降解酶,非限制性核酸内切酶,核酸降解酶,DNA降解酶,RNA降解酶,广谱核酸酶,工业级核酸酶,Benzonase Nuclease(Strep-tag II)